Daxx与雄激素受体结合的功能片段筛选
DOI:
作者:
作者单位:

作者简介:

通讯作者:

基金项目:

国家自然科学基金(30971170、30971267、30600249)资助;;湖南省教育厅优秀青年项目(09B089)


Selection of the Daxx Domain Interacting with Androgen Receptor
Author:
Affiliation:

Fund Project:

  • 摘要
  • |
  • 图/表
  • |
  • 访问统计
  • |
  • 参考文献
  • |
  • 相似文献
  • |
  • 引证文献
  • |
  • 资源附件
    摘要:

    目的体外筛选出能与雄激素受体具有相互作用的Daxx结构域。方法应用聚合酶链反应扩增Daxx四个不同功能结构域,分别连接到带有GST标记的原核表达质粒pGEX-6p-1中,构建Daxx四个功能结构域的原核表达载体。经测序鉴定转化E Coli.BL21DE3菌株,经氨苄青霉素筛选并扩增阳性克隆,用IPTG诱导蛋白表达后纯化蛋白,采用GST pu ll-down体外筛选出与雄激素受体具有相互作用的Daxx功能结构域。结果Daxx不同功能结构域的四个原核表达载体pGEX-6p-1/Daxx/DM1-240、pGEX-6p-1/Daxx/DM241-501、pGEX-6p-1/Daxx/DM502-625和pGEX-6p-1/Daxx/DM626-740经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序分析,证实插入质粒的片段大小正确,无读码框移位和突变。IPTG诱导后蛋白表达具有明显差异性,表达蛋白与预期表达蛋白质分子量大小相当。纯化蛋白进行GST pu ll-down实验结果显示Daxx与雄激素受体具有相互作用。结论Daxx通过第626-740位氨基酸序列与雄激素受体相互结合。

    Abstract:

    Aim To select the functional domain of Daxx which can interact with androgen receptor(AR). Methods Four functional domains of Daxx were amplified by polymerase chain reaction(PCR) and subcloned to a prokaryotic expression vector(pGEX-6p-1) respectively.The recombinant DNA fragments were identified by DNA sequencing.All recombinant vectors were stably transformed into E Coli.BL21DE3 and induced by IPTG.Four recombinant peptides were detected to interact with AR by using GST pull-down in vitro,respectively. Results The results of pGEX-6p-1/Daxx/DM1-240,pGEX-6p-1/Daxx/DM241-501,pGEX-6p-1/Daxx/DM502-625 and pGEX-6p-1/Daxx/DM626-740 from DNA sequencing indicates that there is no reading frame shifts and mutations in recombinant.The protein expressed from pGEX-6p-1/Daxx/DM626-740 can interact with AR by using GST pull-down in vitro. Conclusion The 626th to 740th in amino acid of Daxx can combine AR.

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

庹勤慧,徐桂娜,郭琰,朱炳阳,廖端芳. Daxx与雄激素受体结合的功能片段筛选[J].中国动脉硬化杂志,2010,18(12):931~934.

复制
分享
文章指标
  • 点击次数:
  • 下载次数:
历史
  • 收稿日期:2010-10-15
  • 最后修改日期:2010-11-08
  • 录用日期:
  • 在线发布日期: