摘要:作者以前的研究发现蛋白激酶C ζ介导血管紧张素Ⅱ经Ras MEK途径激活血管平滑肌细胞丝裂素活化的蛋白激酶MAPK或细胞外信号调节激酶ERK1/ 2。本文研究了P85磷酯肌醇 3激酶 蛋白激酶C ζ复合物核蛋白体激酶p70S6激酶活性的调节作用及其信号传递途径。WesternBlot分析显示正常培养的血管平滑肌细胞表达p70S6激酶、p85磷酯肌醇3激酶和蛋白激酶C ζ。10 0nmol血管紧张素Ⅱ和10 μg/L血小板源生长因子刺激并不影响p70S6激酶、p85磷酯肌醇3激酶和蛋白激酶C ζ表达。p70S6激酶磷酸转移酶活性分析发现血管紧张素Ⅱ与血管平滑肌细胞作用5min即开始激活p70S6激酶,2 0min达高峰,并呈剂量依赖性。磷酯肌醇 3激酶抑制剂wort mannin (10nmol)、蛋白激酶C ζ抑制剂PseudoZ (5 0 μmol)和p70S6激酶抑制剂rapamycin (10 0 μg/L)均可明显阻断血管紧张素Ⅱ诱导的p70S6激酶激活。有趣的是,我们观察到p85磷酯肌醇3激酶和蛋白激酶C ζ受血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子刺激后均向Ras转位并与之结合,抗Ras抗体可将p85磷酯肌醇3激酶或蛋白激酶C ζ混合沉淀,抗p85磷酯肌醇 3激酶抗体亦可使蛋白激酶C ζ沉淀下来。提示Ras、p85磷酯肌醇 3激酶和蛋白激酶C ζ三种蛋白结合在一起形成一个功能复合体,Wortmannin和PseudoZ可阻断这个功能复合体的形成。此外,血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子与血管平滑肌细胞孵育2 4h明显促进细胞增殖,氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率增加约5 0 % ,Wortmannin和非特异性蛋白激酶C抑制剂Chelerythine均抑制血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子对血管平滑肌细胞的促增殖作用。综合上述结果,说明血管紧张素Ⅱ通过Ras 磷酯肌醇 3激酶 蛋白激酶C ζ途径激活p70S6激酶和刺激血管平滑肌细胞增殖,p85磷酯肌醇 3激酶 蛋白激酶C ζ复合物在其中起重要调节作用。
