大鼠乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶的C末端片段在大肠杆菌中的融合表达及纯化
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Fusion Expression and Purification of Rat Acyl Coenzyme A∶Cholesterolacyltransferase (Amino Acid 480~545) in E.coli
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    为进一步探讨乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的结构和功能的关系,经聚合酶链反应扩增得到的乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶(ACAT)的C末端膜外结构域(氨基酸480~545)用Ecorl酶解,插入到表达载体pGEX 2TK中,得到重组表达质粒pGEX 2TK/ACAT(氨基酸480~545)。阳性重组子在大肠杆菌中经异丙基 β D硫代半乳糖苷诱导表达谷胱甘肽转移酶-乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶(氨基酸480~545),重组表达菌裂解上清液经谷胱甘肽 SepharoseCL 4B亲和柱纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernbloting分析显示得到了较纯的谷胱甘肽转移酶-乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶(氨基酸480~545)融合蛋白。乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶的C末端膜外结构域(氨基酸480~545)的分离纯化为抗谷胱甘肽转移酶-乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶(C未端片段)抗体的制备及其乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶结构和功能关系的进一步研究打下了基础。

    Abstract:

    Aim Fusion expression and purification of GST fusion protein of the extra membrane domxin of rat acyl coenzyme A:cholesterolacyltransferase (ACAT, amino acid 480~545). Methods Rat ACAT (amino acide 480~545)amplified by PCR was digested with EcoRI and then subcloned into the expression vector pGEX 2TK to get recombinant plasmid pGEX 2TK/rat ACAT (amino acid 480~545).Upon IPTG induction,GST rat ACAT(amino acid 480~545) was expressed in E.coli. The expressed product was purified with Glutathione Sepharose CL 4B affinity chromatography from cellular lysate. Results SDS PAGE and Western blotting analysis showed that purified GST fusion protein of rat ACAT(amino acid 480~545)was obtained. Conclusion The purification of GST fusion protein of the extra membrane domain of rat ACAT(amion acid 480~545)may be useful in the production of antibody against C terminus of rat ACAT and in the studies of the relationship between the structure of ACAT and it’s functions. 还原

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张春妮; 袴田秀; 宫崎章; 松田浩史; 堀内正公;.大鼠乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶的C末端片段在大肠杆菌中的融合表达及纯化[J].中国动脉硬化杂志,1999,7(2):45~47.

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