摘要:目的通过原代培养SD大鼠的乳鼠心肌细胞建立H2O2心肌细胞氧化应激损伤模型,观察脂联素对心肌细胞氧化应激所致内质网应激的保护作用。方法采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,通过α-肌动蛋白免疫荧光法对培养的心肌细胞进行鉴定。选用原代培养3~4天的心肌细胞,随机分为对照组、H2O2组、H2O2+10 mg/L脂联素组、H2O2+20 mg/L脂联素组和H2O2+30 mg/L脂联素组。实验终止后,在倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态的变化,采用化学比色法测定乳酸脱氢酶的释放,通过流式细胞术来检测心肌细胞的凋亡,用RT-PCR与W estern B lotting方法检测内质网应激指标GRP78和Caspase-12的表达。结果与对照组相比,给予H2O2后,细胞凋亡率显著增加(70.7%±6.4%比1.0%±0.6%,P<0.05),LDH释放增加(1411.5±189.7 U/L比353.3±50.3 U/L,P<0.05),内质网伴侣蛋白GRP78以及Caspase-12在mRNA(分别为1.25±0.50比0.18±0.10和1.32±0.15比0.26±0.06)及蛋白水平(分别为0.92±0.50比0.37±0.10和1.24±0.50比0.51±0.01)表达增加(P<0.05),30 mg/L脂联素预处理后给予H2O2,可较大程度地逆转上述指标变化,细胞凋亡率显著下降(43.6%±3.8%),LDH释放减少(686.7±61.1 U/L),内质网伴侣蛋白GRP78以及Caspase-12在mRNA(分别为0.56±0.03和0.83±0.04)及蛋白水平(分别为0.66±0.03和0.64±0.03)表达减少(P<0.05)。结论氧化应激使GRP78和Caspase-12表达增强,启动内质网应激,脂联素可以通过减轻内质网应激逆转H2O2所致的心肌细胞损伤及凋亡作用,对心肌细胞有保护作用。