摘要:目的 初步探索p38-丝裂原激活蛋白激酶(p-38MAPK)与低密度脂蛋白胆固醇受体(LDLR)在高血脂加重脑缺血的作用。 方法 将大鼠分为假手术组(正常饲料)、正常+大脑中动脉栓塞(MCAO)组(正常饲料)与高脂+MCAO组(高脂饲料),喂养30天,行大脑中动脉线栓法(MCAO)造成局灶性脑缺血。测定血脂水平,通过神经活动评分、缺血脑组织梗死重量、TUNEL细胞凋亡、Western Blot测定p-p38蛋白表达、免疫荧光对LDLR与p-p38双染等指标,观察高脂饲料对脑缺血程度的影响。 结果 高脂+MCAO组血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)均显著高于正常+MCAO组(P<0.01)。高脂+MCAO组与正常+MCAO组比较,神经活动评分明显升高(P<0.01),且程度随时间加重(P<0.01),缺血脑组织重量明显增加(P<0.01)；脑皮层细胞凋亡率明显增加(P<0.01),海马组织p-p38蛋白表达显著增加(P<0.01),位于海马组织CA1区；LDLR荧光染色明显增加,位于海马组织锥体细胞层。 结论 LDLR与p-p38在高血脂加重脑缺血的作用位点不同,LDLR染色定位于海马组织锥体细胞层,p-p38定位在CA1区非锥体细胞层,提示高血脂加重脑缺血可能从LDLR受体和p38-MAPK信号通路途径(与巨噬细胞炎性环节有关)两个环节起作用。

摘要:目的 观察西罗莫司造成血管内皮钙超载引起细胞损伤并探讨其相关机制。方法 在西罗莫司处理和利阿诺定稳定利阿诺定受体通道的情况下,采用MTT法检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞存活率,HE染色观察细胞形态,一氧化氮(NO)检测试剂盒测定培养液NO含量,Ca2＋敏感的荧光染料Fluo-3 AM标记胞质Ca2＋,分别采用流式细胞仪分析和激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca2＋水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡率。结果 西罗莫司能降低细胞存活率(P<0.01)。西罗莫司500 nmol/L刺激24 h后,HE染色发现细胞肿胀,核固缩、核碎裂及胞浆空泡；NO含量降低,细胞内Ca2＋含量增高,线粒体膜电位降低,细胞凋亡率增加(P均＜0.01)。与西罗莫司500 nmol/L组相比,利阿诺定50 μmol/L干预组细胞存活率明显增加(P<0.01),细胞内Ca2＋含量降低(P<0.05),细胞培养液NO含量由28.33±4.18 μmol/L增至47.03±3.87 μmol/L(P<0.01),线粒体膜电位水平由0.24±0.03增至0.45±0.04(P<0.01),细胞凋亡率由43.3%±2.0%降至30.7%±0.9%(P<0.01)。结论 西罗莫司可能通过内质网利阿诺定受体途径增加细胞内Ca2＋水平,造成钙超载和线粒体损害,继而引起细胞凋亡。