摘要:目的 探讨癌胚抗原相关黏附分子1(CEACAM1或CC1)对柯萨奇病毒(CVB3)感染后柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)表达和继发心肌损伤的影响。方法 构建过表达小鼠CC1重组病毒,包装重组慢病毒pLVX-CEACAM 1-ZsGreen-Puro(rLV-CEACAM 1)并测定慢病毒生物学滴度。分为CC1正常组、CC1过表达组、CC1正常+CVB3组和CC1过表达+CVB3组；各组使用AnnxinV-PE/7-AAD双染法检测心肌细胞凋亡率,CCK8检测细胞活性；qPCR检测CAR基因表达；Western blot检测CAR蛋白表达,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果 (1)CEACAM1重组载体测序提示目的基因序列连接,证明小鼠CEACAM1重组病毒载体构建成功,测定重组慢病毒滴度为1.5×1011 TU/L。(2)CC1过表达+CVB3组较其他组心肌细胞凋亡率明显升高,心肌细胞增殖最低(P<0.05)。(3)CAR基因相对表达量在CC1过表达+CVB3组最高,而在CC1正常组最低,CAR蛋白表达也有类似结果；CC1过表达组较CC1正常组胞内CVB3相对表达量显著升高(P<0.05)。(4)CC1过表达组TNF-α、IL-1β水平较高,CVB3感染后较前明显升高。结论 CC1可能可以促进CVB3感染心肌细胞后心肌组织或细胞上CAR的表达,CAR可能是CC1调控CVB3感染心肌致心肌损伤过程的潜在作用靶点。

摘要:目的 探讨坏死性凋亡(Nec)与活性氧(ROS)之间的相互作用能否介导高糖引起的H9c2 心肌细胞损伤。方法 应用蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测心肌细胞RIP3 蛋白的表达水平；细胞计数盒测定心肌细胞存活率；罗丹明 123(Rh123)染色荧光显微镜摄片测定线粒体膜电位(MMP)；2’, 7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色荧光显微镜摄片检测心肌细胞内ROS水平；Hoechst 33258核染色荧光显微镜摄片测定凋亡细胞的数量。结果 应用高糖(HG,35 mmol/L 葡萄糖)分别处理H9c2 细胞0～24 h,其中3、6、9、12和24 h均能明显地上调RIP3 蛋白的表达水平,24 h时RIP3 蛋白表达上调最为明显。应用100 μmol/L Nec的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1)共处理心肌细胞可对抗高糖引起的RIP3 蛋白表达的上调作用。此外,100 μmol/L Nec-1能显著地抑制高糖引起的细胞毒性、线粒体损伤及氧化应激,使细胞存活率升高,MMP丢失及ROS生成减少。1 000 μmol/L ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)预处理心肌细胞60 min,可明显地抑制高糖对心肌细胞RIP3 蛋白表达的上调作用；此外,高糖诱导的细胞凋亡和细胞毒性作用,经NAC预处理后均能得到显著的抑制。结论 Nec与ROS之间的相互作用介导高糖对心肌细胞的损伤。

摘要:目的　研究活性氧（ROS）和ATP敏感性钾通道（KATP通道）的相互作用在高糖（HG）引起的心肌细胞损伤中的作用。方法　应用Western　blot检测心肌细胞KATP通道蛋白、Cleaved　Caspase-3的表达水平；双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测胞内ROS水平；细胞计数盒测定心肌细胞存活率；Hoechst　33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞数量的变化；JC-1染色法测定线粒体膜电位。结果　应用高糖（35　mmol/L葡萄糖）处理H9c2心肌细胞24　h能明显下调KATP通道蛋白的表达水平，1000　μmol/L　N-乙酰半胱氨酸（ROS清除剂）预处理心肌细胞60　min可阻断HG对心肌细胞KATP通道蛋白表达的下调作用。100　μmol/L二氮嗪（线粒体KATP通道开放剂）和50　μmol/L吡拉地尔（非选择性KATP通道开放剂）预处理均显著抑制HG引起的心肌细胞ROS的堆积。1000　μmol/L　N-乙酰半胱氨酸、100　μmol/L二氮嗪和50　μmol/L吡拉地尔均能抑制HG引起的心肌细胞损伤，使细胞存活率升高，凋亡细胞数量、Cleaved　Caspase-3表达及线粒体膜电位丢失减少。结论　在HG状态下，心肌细胞的ROS和KATP通道存在相互作用，两者在HG引起的心肌细胞损伤中发挥重要作用。