摘要:目的 探讨过表达网膜素对糖尿病动脉硬化大鼠主动脉胶原含量的影响。方法 选用60只1月龄雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为正常对照组(NC组；n＝8)和实验组(n＝52)。实验组采用高脂高糖饲料喂养联合尾静脉注射2%链脲佐菌素(30 mg/kg),建立糖尿病大鼠模型；成模的糖尿病大鼠再灌胃给予维生素D3(70万IU/kg),继续喂养16周,建立糖尿病合并动脉硬化大鼠模型。将最终24只糖尿病动脉硬化大鼠,依随机数字表法分为糖尿病动脉硬化组(DAC组；n＝8)、糖尿病动脉硬化＋空病毒组(DAC＋E组；n＝8)和糖尿病动脉硬化＋网膜素组(DAC＋O组；n＝8)。将150 μL携带人网膜素基因ITLN1-AAV9的腺相关病毒和携带空质粒的病毒经尾静脉分别注射至DAC＋O组和DAC＋E组,等量生理盐水注射至NC组和DAC组。继续高脂饲料喂养4周,处死大鼠,测定血清及肝脏网膜素、血脂水平；取主动脉进行HE染色；应用定量实时聚合酶链反应测定胶原Ⅰ、Ⅲ、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9 mRNA含量；Western blot测定主动脉胶原Ⅰ、Ⅲ、MMP-2、MMP-9蛋白含量；黄嘌呤氧化酶法测定主动脉超氧化物歧化酶(SOD)含量,硫代巴比妥酸缩合法测定主动脉丙二醛(MDA)水平。结果 (1)与NC组相比,糖尿病动脉硬化大鼠血清中大鼠网膜素水平显著下降。给予携带人网膜素基因的腺相关病毒静脉注射后,在DAC＋O组的大鼠血清中测定人网膜素为(101.0±0.2) μg/L,肝脏中测得人网膜素为(98.3±1.9) μg/L,在其他组别的相应组织中未测出人网膜素。(2)与DAC组相比,DAC＋E组和DAC＋O组血清血脂谱和主动脉MDA均显著下降,SOD升高,但后2组间差异无统计学意义。(3)DAC组主动脉内膜部分脱落,平滑肌增生,局部透明变性并钙化。DAC＋O组内膜完整,局部管壁增厚,平滑肌增生和钙化程度较DAC组明显改善。(4)与DAC＋E组相比,DAC＋O组胶原Ⅰ、Ⅲ mRNA表达显著下降,胶原Ⅲ蛋白表达显著下降。与DAC＋E组相比,DAC＋O组MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义。结论 在糖尿病动脉硬化大鼠体内,过表达人网膜素能减少主动脉胶原Ⅲ的表达量,减轻动脉硬化,对氧化应激水平无明显影响。

摘要:目的 研究网膜素对氧化应激作用下的人主动脉平滑肌细胞胶原Ⅰ、Ⅳ表达的影响。方法 将人主动脉平滑肌细胞系培养,细胞密度到达90%以上后,随机分为5组:对照组、氧化应激组、网膜素组、细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂组和丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂组。其中,对照组不增加任何处理,氧化应激组加入叔丁基氢过氧化物(t-BHP,87.1 μmol/L),网膜素组(87.1 μmol/L t-BHP+600 μg/L 网膜素)、ERK抑制剂组、p38MAPK抑制剂组为在网膜素组基础上分别加入ERK抑制剂(PD98059,60 μmol/L)和p38MAPK抑制剂(SB203580,100 μmol/L),应用Western blot法检测细胞中胶原Ⅰ、Ⅳ表达量。结果 应用MTT法,筛选t-BHP最佳作用浓度为87.1μmol/L；与对照组相比,氧化应激组人动脉平滑肌细胞内Ⅰ、Ⅳ型胶原表达显著下降(P<0.01)；与氧化应激组比较,网膜素组Ⅰ、Ⅳ型胶原表达显著升高(P<0.01)；与网膜素组比较,ERK抑制剂组和p38MAPK抑制剂组Ⅰ、Ⅳ型胶原表达均显著下降(P<0.05)。结论 网膜素能改善氧化应激对人动脉平滑肌细胞Ⅰ、Ⅳ型胶原表达抑制的作用,可能通过此机制促进动脉粥样硬化斑块的稳定,ERK/p38MAPK途径可能参与网膜素的信号传导。