摘要:目的 探讨microRNA(miRNA)和衰老心肌细胞自噬之间的关系。 方法 使用0、4、8、16、20 g/L D-半乳糖刺激大鼠心肌细胞H9c2衰老,刺激3、6、9天后,β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老水平；电镜观察D-半乳糖刺激衰老大鼠心肌细胞自噬体形成；分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测衰老大鼠心肌细胞与正常H9c2细胞中miRNA-30a、miRNA-126、miRNA-204及自噬蛋白LC3B II/LC3B I表达水平。 结果 与对照组比较,随着药物浓度的升高及刺激天数的增加,细胞染色逐渐加深,在D-半乳糖浓度为8 g/L刺激9天时,细胞染色最明显；电镜结果显示,D-半乳糖诱导衰老心肌细胞自噬体减少；Western blot结果显示,衰老心肌细胞LC3B II/LC3B I水平降低；实时荧光定量PCR结果显示,诱导衰老组心肌细胞中,miRNA-30a、miRNA-126表达水平明显下降,miRNA-204表达水平明显上升。 结论 D-半乳糖诱导的衰老心肌细胞自噬水平降低的过程中,存在miRNA-30a、miRNA-126表达水平的降低以及miRNA-204表达水平的增加,miRNA的差异表达可能是衰老心肌细胞自噬水平变化的重要机制。

摘要:目的 探讨D-半乳糖诱导大鼠衰老过程中对大鼠肺纤维化、肺组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平及透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和Ⅲ型胶原(COL3)含量的影响,并分析MMP-2与HA、LN和COL3的相关性。 方法 将健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组和D-半乳糖组。采用HE染色法观察两组大鼠肺组织形态学变化；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测两组大鼠肺组织MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的改变；免疫组织化学法分析肺组织MMP2蛋白的表达水平；ELISA法检测大鼠肺组织中HA、LN和COL3的含量,并分析相关性。 结果 HE染色结果发现D-半乳糖组大鼠肺组织发生明显的纤维化改变；qRT-PCR结果显示肺组织中MMP-2 mRNA表达水平高于对照组(P＜0.05)；免疫组织化学法和Western blot结果显示肺组织中MMP-2蛋白表达水平明显高于对照组(P＜0.05)；COL3和LN含量高于对照组,而HA含量低于对照组(P＜0.05)。相关性分析结果显示,大鼠肺组织中MMP-2表达水平与COL3、LN呈正相关(r=0.2741,P＜0.05；r=0.2841,P＜0.05),而与HA呈负相关(r=-0.1782,P＜0.05)。 结论 D-半乳糖诱导大鼠衰老过程中可以引起肺组织发生纤维化改变,同时增加大鼠肺组织MMP-2表达及COL3和LN含量,降低HA的含量,且MMP-2与COL3、LN和HA之间具有相关性,可能为肺纤维化的早期诊断提供实验依据。