摘要:目的 探讨细胞外超氧化物岐化酶(EC-SOD)在同型半胱氨酸(Hcy)致巨噬细胞氧化应激中的作用及机制。方法 将THP-1单核细胞用佛波酯刺激48 h后演变成巨噬细胞,用0、50、100、200、500 μmol/L Hcy作用细胞72 h,并加设叶酸＋维生素B12(VitB12)干预组(100 μmol/L Hcy＋30 μmol/L叶酸＋30 μmol/L VitB12)。微板法检测氧化应激指标(H2O2、O2－、OH－)的变化；实时荧光定量PCR检测巨噬细胞中EC-SOD的mRNA表达水平；Western blot检测巨噬细胞中EC-SOD的蛋白表达水平；EC-SOD测定试剂盒检测EC-SOD活性。分别构建EC-SOD重组质粒和干扰质粒转染细胞,检测EC-SOD的mRNA及蛋白的表达水平以及超氧阴离子的表达。结果 与对照组相比,100、200、500 μmol/L Hcy组H2O2、OH－活性显著增高 (P＜0.01),EC-SOD mRNA和蛋白表达明显降低(P＜0.01)。与对照组相比,100、200、500 μmol/L Hcy组EC-SOD活性分别下降了13.92%、8.62%、10.32%(P＜0.05,P＜0.01)。与100 μmol/L Hcy组相比,叶酸＋VitB12干预组EC-SOD mRNA的表达升高了47%。分别转染EC-SOD重组质粒和干扰质粒后,与100 μmol/L Hcy组相比,EC-SOD重组组O2－含量降低了63.89%,干扰片段-596组O2－含量则增加了33.59%(P＜0.05,P＜0.01)。结论 EC-SOD参与了Hcy导致的单核细胞源性巨噬细胞的氧化应激。在抑制Hcy诱导动脉粥样硬化的过程中,EC-SOD可能发挥着重要的作用。

摘要:目的 探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)致泡沫细胞胆固醇聚积中的作用和意义。方法 体外复制THP-1单核细胞/泡沫细胞模型,油红O染色验证模型复制是否成功,给予100 μmol/L Hcy处理细胞24 h后,实时定量PCR和Western blot检测泡沫细胞中FABP4 mRNA和蛋白的表达；体外构建FABP4过表达载体,双酶切法鉴定；转染FABP4至泡沫细胞,荧光倒置显微镜观察转染效率；胆固醇检测试剂盒检测细胞内胆固醇聚积情况。结果 油红O染色显示泡沫细胞质内充满了大量红染脂质颗粒,胞核呈蓝色,且100 μmol/L Hcy处理后细胞内胆固醇含量升高了2.4倍(P＜0.01)；实时定量PCR结果显示100 μmol/L Hcy处理后泡沫细胞中FABP4 mRNA表达上调(P＜0.01)；Western blot检测结果显示FABP4的蛋白表达与其mRNA表达变化一致(P＜0.01)。FABP4过表达载体转染细胞后,可见大量绿色荧光蛋白表达；重组质粒组泡沫细胞中FABP4的表达水平明显升高(P＜0.01),细胞内胆固醇含量升高1.9倍,差异具有显著性(P＜0.01)。结论 FABP4表达上调可能是Hcy致泡沫细胞胆固醇聚积的重要机制之一。