摘要:目的]探寻葛花提取物(PFE)对巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的影响。 [方法]通过MTT法筛选PFE对THP-1源性泡沫细胞的作用浓度,采用油红O染色和胆固醇检测试剂盒检测细胞内脂质蓄积情况,采用胆固醇流出试剂盒检测细胞的胆固醇流出水平,使用RT-qPCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达。 [结果]PFE显著降低THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积。PFE不影响CD36、清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)、固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)及3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)的mRNA表达,但能上调ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05),促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出(P＜0.01)。PFE可以激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的活性(P＜0.01)及上调其mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05)。与PFE对照组相比,加入GW9662处理后PPARγ和ABCA1的蛋白表达水平均下降(P＜0.01),胆固醇流出水平降低(P＜0.01)。 [结论]PFE可显著改善THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积,通过PPARγ上调ABCA1表达及其介导的胆固醇流出抑制泡沫细胞形成。

摘要:目的 观察荷叶碱(NF)对巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆固醇流出的影响及机制。方法 体外培养人源性THP-1单核细胞,使用佛波酯(160 nmol/L)对其进行诱导,促进其分化为巨噬细胞,并在50 mg/L氧化低密度脂蛋白处理下,使其荷脂形成泡沫细胞,进行常规体外培养细胞。高效液相色谱检测泡沫细胞内脂质成分,液体闪烁计数仪检测泡沫细胞胆固醇流出的水平；实时荧光定量PCR和Western blot检测ABCA1表达情况。PPARγ抑制剂GW9662和LXRα抑制剂GGPP分别处理泡沫细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测荷叶碱对泡沫细胞PPARγ、LXRα和ABCA1表达的影响。结果 荷叶碱显著减少泡沫细胞内的脂质成分,增加ABCA1表达与胆固醇流出水平。PPARγ抑制剂GW9662处理细胞后,显著降低了PPARγ、LXRα和ABCA1的表达。泡沫细胞在LXRα抑制剂GGPP处理下,也明显降低了LXRα和ABCA1表达。结论 荷叶碱通过PPARγ/LXRα途径上调巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达,促进胆固醇流出,减少细胞内脂质蓄积。

摘要:目的 探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)经由血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)受体对PPARγ-LXRα-ABCA1通路激活的作用。 方法 浓度梯度ox-LDL(0～40 mg/L,12 h)刺激J774A.1巨噬细胞,检测LXRα、ABCA1的表达。构建293T细胞LOX-1过表达的PPARγ双荧光素酶报告基因系统,激光共聚焦及Western blot检测LOX-1的分布与表达,双荧光素酶报告基因系统检测PPARγ的转录活化情况。对J774A.1巨噬细胞分别进行LOX-1 siRNA和PPARγ siRNA沉默,ox-LDL(30 mg/L,12 h)孵育后检测LXRα、ABCA1蛋白的表达。 结果 ox-LDL可显著上调J774A.1细胞LXRα和ABCA1的表达(P＜0.01,n＝3)。LOX-1过表达的PPARγ双荧光素酶报告基因系统检测显示ox-LDL能够通过LOX-1增加PPARγ的转录活性；对J774A.1巨噬细胞分别进行LOX-1 siRNA、PPARγ siRNA沉默后发现,LXRα和ABCA1的表达均显著降低(P＜0.01,n＝3)。 结论 ox-LDL可通过LOX-1受体激活PPARγ转录活性,从而上调LXRα、ABCA1蛋白表达,完成PPARγ-LXRα-ABCA1信号通路的激活。

摘要:目的 观察荷叶生物碱对THP-1源性巨噬细胞CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ（PPARγ）表达的影响，探讨荷叶生物碱干预CD36表达及其信号传导途径。方法 THP-1单核细胞分化为巨噬细胞后，随机分为四组：空白对照组、ox-LDL组、荷叶生物碱组、环格列酮组，油红O染色观察THP-1巨噬细胞内脂质变化，RT-PCR和Western blot检测CD36和PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较，经ox-LDL干预后，THP-1巨噬细胞内脂质蓄积增加，CD36和PPARγ的表达增加；与ox-LDL组比较，经荷叶生物碱干预后，THP-1巨噬细胞内脂质积蓄减少，CD36和PPARγ的表达减少；与荷叶生物碱组比较，经环格列酮干预后，THP-1巨噬细胞内脂质无明显变化，CD36和PPARγ的表达增加。结论 荷叶生物碱通过下调CD36的表达抑制巨噬细胞泡沫化进展，荷叶生物碱可能是通过下调PPARγ来抑制CD36的表达。

摘要:目的　探讨白藜芦醇抗动脉粥样硬化的效应及其可能机制。方法　成熟雄性新西兰大白兔42只，分为三组：空白组（n10）普通饲料喂养；模型组（n18）高脂饲料喂养；白藜芦醇组（n14）高脂饲料加白藜芦醇［16　mg/（kg·d）］干预。TUNEL法检测细胞凋亡，RT-PCR检测主动脉过氧化体增殖物激活型受体γ（PPARγ）、Fas、FasL及Caspase-3　mRNA表达水平，ELISA测定血清中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及组织型基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）的蛋白表达水平。结果　成功建立动脉粥样硬化模型。白藜芦醇组动脉粥样硬化病变明显减轻，可抑制斑块内细胞凋亡；PPARγ　mRNA转录增高，Fas、FasL和Caspase-3　mRNA转录显著下降；MCP-1和MMP-9蛋白表达水平显著降低，TIMP-1蛋白表达增高。结论　白藜芦醇具有抗动脉粥样硬化作用，这一作用类似PPARγ激动剂，可通过上调斑块内PPARγ的基因转录，降低Fas、FasL和Caspase-3　mRNA转录，以及降低MCP-1、MMP-9的表达同时促进TIMP-1的表达来实现。

摘要:目的 探讨血管紧张素1-7［Ang（1-7）］对大鼠血脂及胆固醇逆转运相关因子ATP结合盒转运子A1（ABCA1）、过氧化体增殖物激活型受体γ（PPARγ）、肝X受体α（LXRα）和视黄酸X受体α（RXRα）表达的影响。方法 将40只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、高脂饲料组、Ang（1-7）组及Ang（1-7）＋A779组。通过植入式胶囊渗透压泵，经颈静脉插管持续给予Ang（1-7），28天后，检测各组大鼠血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇水平，定量实时聚合酶链反应及Western blot检测各组大鼠动脉组织中ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα基因表达的变化。结果 与正常对照组比较，高脂饲料组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所升高（P<0.05），高密度脂蛋白胆固醇有所降低（P<0.05）;与高脂饲料组比较，Ang（1-7）组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所降低（P<0.05），高密度脂蛋白胆固醇有所升高（P<0.05）;与Ang（1-7）组比较，Ang（1-7）＋A779组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所升高（P<0.05），高密度脂蛋白胆固醇有所降低（P<0.05）。与正常对照组比较，高脂饲料组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所降低（P<0.05）;与高脂饲料组比较，Ang（1-7）组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所升高（P<0.05）;与Ang（1-7）组比较，Ang（1-7）＋A779组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所降低（P<0.05）。结论 Ang（1-7）能够降低大鼠血浆中血脂水平，促进大鼠动脉组织中ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的基因表达，对高脂血症有一定的治疗作用。

摘要:目的观察过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂和拮抗剂对THP-1巨噬细胞胆固醇蓄积及CD36表达的影响。方法实验分对照组、氧化型低密度脂蛋白组、Ciglitazone处理组和GW9662处理组，后两组用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白分别与过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂Ciglitazone（10 μmol/L）及拮抗剂GW9662（10 μmol/L）共同孵育24 h，高效液相色谱分析法检测细胞总胆固醇蓄积情况，RT-PCR和Western blot分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组（76.28±10.36 mg/g）相比，氧化型低密度脂蛋白（121.63±13.32 mg/g）能使细胞总胆固醇含量显著增加，而Ciglitazone能使氧化型低密度脂蛋白处理的细胞总胆固醇含量进一步增加（136.23±14.78 mg/g），GW9662能使氧化型低密度脂蛋白处理的细胞总胆固醇含量减少（98.52±11.45 mg/g）。过氧化体增殖物激活型受体γ拮抗剂GW9662使巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达下调及胆固醇蓄积减少，过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂Ciglitazone使巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达上调及胆固醇蓄积增多。结论过氧化体增殖物激活型受体γ拮抗剂使THP-1巨噬细胞胆固醇蓄积减少及氧化型低密度脂蛋白诱导的CD36表达下调。

摘要:目的观察过氧化体增殖物激活型受体γ信号转导通路在内脂素调控人THP-1单核细胞源性巨噬细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达中的作用,探讨内脂素诱导泡沫细胞形成的机制和途径。方法THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度的内脂素和过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂罗格列酮进行干预,分别运用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,逆转录聚合酶链反应法和免疫印迹法检测细胞过氧化体增殖物激活型受体γ和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白的表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量,总胆固醇与游离胆固醇之差为胆固醇酯含量。结果与对照组比较,内脂素组细胞内脂滴形成增加,过氧化体增殖物激活型受体γmRNA和蛋白表达水平降低(P><0.05),酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平升高(P><0.05),细胞内胆固醇酯含量升高(P><0.05);随着内脂素浓度(10-7mol/L、10-6mol/L和10-5mol/L)升高,过氧化体增殖物激活型受体γmRNA和蛋白表达水平逐渐降低(r值分别为-0.73和-0.83,P><0.05),酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平逐渐升高(r值分别为0.91和0.72,P><0.05)。与内脂素组比较,罗格列酮组酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平降低(P><0.05),细胞内胆固醇酯含量降低(P><0.05);随着罗格列酮浓度(10μmol/L、15μmol/L和20μmol/L)升高,酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平逐渐降低(r值分别为-0.69和-0.84,P><0.05)。结论内脂素呈浓度依赖性下调THP-1单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ的表达,上调酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达,而罗格列酮呈浓度依赖性抑制内脂素所诱导的上述效应。提示内脂素可能通过过氧化体增殖物激活型受体γ信号转导通路上调酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达,使细胞内胆固醇酯合成增加,从而诱导泡沫细胞形成。

摘要:目的探讨罗格列酮对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及迁移行为的影响。方法组织贴块法原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞,胞浆内免疫组织化学染色鉴定细胞。取第5代纯化细胞无血清培养使细胞同步,用血小板源性生长因子BB或碱性纤维细胞生长因子诱导细胞增殖和迁移,之前不加或加入罗格列酮(1、5和10μmol/L)进行预处理。应用免疫组织化学染色法检测细胞核内增殖细胞核抗原的表达,流式细胞仪分析细胞周期分布,Boyden趋化小室观测细胞迁移能力。结果罗格列酮能够显著抑制血小板源性生长因子BB或碱性纤维细胞生长因子诱导的平滑肌细胞核内增殖细胞核抗原的表达,抑制细胞由G0/G1期向S期的转变,抑制细胞在Boyden室间的迁徙,且呈明显的剂量依赖关系(P<0.0001)。结论罗格列酮能够抑制血小板源性生长因子BB或碱性纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞的增殖和迁移。

摘要:目的观察槟榔碱对氧化型低密度脂蛋白诱导的小鼠巨噬细胞炎症因子表达的影响,并探讨其作用机制。方法不同浓度槟榔碱(10-6、10-5、10-4和10-3mol/L)处理细胞24h,台盼兰拒染法观察细胞活力;氧化型低密度脂蛋白诱导小鼠巨噬细胞,同时给予槟榔碱处理,采用逆转录聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和细胞间黏附分子1mRNA的表达以及过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达。结果槟榔碱处理细胞24h后,10-3mol/L组细胞活力下降(P<0.01),而10-6、10-5和10-4mol/L组对细胞活力无明显影响;10-6、10-5和10-4mol/L槟榔碱分别处理细胞24h后,对肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和细胞间黏附分子1mRNA的表达无明显影响;10-6mol/L槟榔碱与氧化型低密度脂蛋白共同处理细胞24h后,细胞肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和细胞间黏附分子1mRNA的表达无显著改变,而10-5和10-4mol/L槟榔碱明显抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的小鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和细胞间黏附分子1mRNA的表达,且10-5mol/L槟榔碱使氧化型低密度脂蛋白诱导的细胞内过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达增加(P<0.01)。结论槟榔碱抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞炎症因子表达,其作用机理可能是通过过氧化体增殖物激活型受体γ起作用。