摘要:目的 研究姜黄素对ApoE基因敲除(ApoE－/－)小鼠动脉粥样硬化进展及斑块中巨噬细胞极性的影响。方法 用高脂高胆固醇饮食饲养ApoE－/－小鼠建立动脉粥样硬化模型,设立姜黄素治疗组、阿托伐他汀治疗组和高脂组；通过免疫组织化学(HE染色、油红O染色、Masson染色、苏木精染色)及免疫荧光染色检测主动脉斑块形态及不同亚型巨噬细胞的含量。通过实时荧光定量PCR检测主动脉组织中炎症因子的表达。结果 姜黄素干预能减轻ApoE－/－小鼠主动脉粥样硬化病变,并降低动脉粥样硬化斑块的易损指数。姜黄素降低动脉粥样硬化斑块内M1/M2巨噬细胞的比值,减少M1型巨噬细胞分泌的促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,促进M2型细胞因子IL-10、Ym1和Fizz1的表达。结论 姜黄素可通过影响斑块中巨噬细胞的极性、抑制相关的炎症反应,从而延缓ApoE－/－小鼠动脉粥样硬化的进展。

摘要:目的 通过对Shiomi等提出的以脂质堆积为核心的斑块易损指数计算方法进行优化,以期更全面、客观地对实验性动脉粥样硬化斑块不稳定性进行评估。方法 实验分为对照组(C57BL/6小鼠)和模型组(LDLR－/－和ApoE－/－小鼠),每组6只动物。对照组给予正常饲料,模型组给予高脂饲料,25周后处死动物,分离主动脉根部和主动脉弓,经OCT包埋后连续切片,分别进行H&E、苦味酸-天狼猩红、油红O、阿利新蓝染色,内皮细胞及平滑肌细胞免疫荧光染色、基质金属蛋白酶及巨噬细胞免疫组织化学染色。对Shiomi等提出的斑块易损指数公式进行改良,在计算公式分子中增加影响斑块不稳定性因素,同时在分母中增加影响斑块稳定性指标,优化动脉粥样硬化斑块易损指数计算公式。通过对比两个公式对LDLR－/－小鼠主动脉根部和无名动脉斑块稳定性的判断,考察评估优化后计算公式的可靠性。之后采用优化公式对高脂饮食ApoE－/－小鼠和LDLR－/－小鼠主动脉不同部位斑块稳定性进行评价,对比两种小鼠动脉粥样硬化进展的差异。结果 模型组小鼠主动脉不同部位斑块破损面积,脂质沉积,胶原蛋白、蛋白多糖和基质金属蛋白酶分布,巨噬细胞浸润,纤维帽内皮细胞覆盖率和平滑肌细胞覆盖率与对照组相比发生明显改变。在此基础上优化了基于多指标病理染色的斑块不稳定性计算公式。通过计算发现,ApoE－/－小鼠和LDLR－/－小鼠无名动脉斑块易损指数明显大于主动脉根部；而在相同部位,ApoE－/－小鼠斑块易损指数明显高于LDLR－/－小鼠。结论 本研究所优化的基于多指标组织病理学染色的斑块易损指数计算公式,涵盖多种影响斑块不稳定性的重要因素,可对斑块不稳定性进行准确评估。该方法简单、全面、可靠,具有较大实用价值。

摘要:目的 探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及其DNA甲基化在载脂蛋白E基因敲除(ApoE－/－)小鼠肾损伤中的作用及意义。方法 实验动物分为2组:(1)ApoE－/－组(n＝10):雄性ApoE－/－鼠饲以高蛋氨酸饮食；(2)对照组(n＝10):雄性C57BL/6J鼠饲以高蛋氨酸饮食。喂养14周后,全自动生物化学分析仪测定小鼠血清肌酐和尿素氮水平；PAS染色及透射电子显微镜观察小鼠肾脏组织损伤情况；实时定量PCR及Western blot分别检测小鼠肾脏中MST1 mRNA和蛋白表达水平。巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测小鼠肾脏MST1 DNA甲基化水平。结果 与对照组比较,ApoE－/－组血清肌酐和尿素氮分别升高了1.1倍和1.6倍(P＜0.01)；PAS染色和透射电镜结果显示,ApoE－/－组较对照组肾脏明显损伤；ApoE－/－小鼠肾脏MST1表达分别与血清肌酐和尿素氮水平呈正相关(R2＝0.7571,P＝0.0012；R2＝0.7342,P＝0.0015)；nMS-PCR结果显示,ApoE－/－组肾脏中MST1 DNA甲基化水平较对照组显著降低(P＜0.01)。结论 MST1表达上调可能在ApoE－/－小鼠肾损伤中发挥重要作用,而MST1启动子区DNA低甲基化改变可能是MST1表达上调的重要机制。