摘要:目的 研究小型猪急性心肌梗死(AMI)后,缺血对心肌成纤维细胞中跨膜蛋白16A(TMEM16A)表达及功能特征的影响。方法 采用三氯化铁(FeCl3)诱发左冠状动脉前降支(LAD)血栓形成的方法建立AMI模型,AMI术后4 h采用血清酶学,超声心动图评价AMI模型。AMI后24 h分离心肌成纤维细胞,用于实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、膜片钳检测,观察TMEM16A的表达及形成的电流强度变化。结果 与术前和假手术组相比,AMI组肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌红蛋白(MYO)浓度明显升高；左心室射血分数(LVEF)显著下降[(53.4±1.9)%,P<0.05]；TMEM16A基因表达显著升高[(1.59±0.15)%,P<0.05]；TMEM16A形成的电流强度明显增强(P<0.05)。刺激电压为+20、+40、+60、+80、+100 mV时,电流强度分别为(1.58±0.67) pA/pF、(3.69±1.26) pA/pF、(7.60±2.14) pA/pF、(12.94±2.38) pA/pF和(22.19±2.61) pA/pF。结论 在小型猪心肌成纤维细胞中表达TMEM16A基因。缺血可上调TMEM16A基因表达,并通过影响心肌成纤维细胞中钙激活氯离子通道(CaCC),增强心肌成纤维细胞中钙激活氯电流(ICl,Ca)。

摘要:为观察肾上腺素对主动脉平滑肌细胞C1-电流的影响及其与Ca2+内流的关系,采用膜片钳单离子通道(细胞贴附式)技术和Fura2荧光法测定细胞内游离Ca2+浓度变化。结果发现,10μmolL肾上腺素可引起氯通道开放概率由对照组的0.061±0.0042增加到0.690±0.011;平均开放时间由1.08±0.23ms延长到6.44±0.57ms。此Cl-电流可被硝苯地平和EGTA抑制。肾上腺素可引起平滑肌细胞内游离Ca2+浓度由静息时77±13nmolL快速升高达峰值随后维持在高水平的内流平台相,达216±27nmolL。Cl-通道阻断剂尼氟灭酸在一定范围内呈浓度依赖性抑制肾上腺素诱发的Cl-电流及Ca2+内流,8μmolL尼氟灭酸对细胞内游离Ca2+浓度的抑制率达27%±8%。结果表明,Cl-通道开放在调节平滑肌细胞Ca2+内流中起重要作用。