摘要:目的 研究Nε-羧甲基赖氨酸(CML)对平滑肌细胞泡沫化中脂质外流的影响,探讨其在促进平滑肌细胞泡沫化中的作用和机制。方法 使用组织贴块法从C57BL/6J小鼠主动脉中提取原代血管平滑肌细胞并进行鉴定；将第3～9代的原代平滑肌细胞分为对照组,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)(50 mg/L)模型组,1、10、100 μmol/L的CML与ox-LDL共刺激组,通过NBD-胆固醇流出实验检测CML对泡沫细胞胆固醇流出率的影响,通过胆固醇含量测定试剂盒测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)水平；将原代血管平滑肌细胞分为四组:对照组、ox-LDL模型组、ox-LDL+CML组、RAGE siRNA沉默组(ox-LDL+CML+siRAGE组)并进行刺激,通过Western blot检测糖基化终末产物受体(RAGE)和胆固醇流出调节子ABCA1的表达；通过油红O染色和油红萃取实验检测各组平滑肌细胞泡沫化程度。结果 与对照组相比,不同浓度CML明显升高平滑肌细胞内TC、CE和FC的含量；胆固醇流出实验表明胆固醇流出率随CML浓度升高而降低；Western blot实验表明与对照组相比,加入CML后RAGE明显升高,ABCA1明显降低,ox-LDL+CML+siRAGE组RAGE的表达降低,并且ABCA1降低水平减少；油红O染色显示ox-LDL能够促使平滑肌细胞内脂质蓄积,CML能够增强其作用,抑制RAGE表达后CML作用减弱。结论 CML通过RAGE抑制脂质外流,促进平滑肌细胞源性泡沫细胞形成。

摘要:动脉粥样硬化是多因素引起的,以动脉壁内脂质的沉积甚至粥样斑块的形成为特征的慢性血管炎症性疾病。巨噬细胞内胆固醇的堆积和泡沫细胞的形成是早期动脉粥样硬化形成的标志。然而,泡沫细胞形成的确切机制尚未完全阐明。于此,我们推测氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL),凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)和活性氧(reactive oxygen spe-cies,ROS)组成了一个促进泡沫细胞形成的“信号通路”,在泡沫细胞的形成乃至诱导动脉粥样硬化发生中起始动作用。在这一通路中,氧化型低密度脂蛋白,这种经过氧化修饰的低密度脂蛋白,是“激活子”;凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1,作为内皮细胞上的氧化型低密度脂蛋白的主要受体是信号“转导子”;活性氧,这氧化型低密度脂蛋白与凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1结合后的直接产物是“催化子”和“诱导剂”。

摘要:目的观察清道夫受体A1和CD36在肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成中的作用。方法给予不同浓度的肺炎衣原体(1×105～1×106IFU)感染THP-1源性巨噬细胞0～72h。运用油红O染色观察细胞质内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化。分别运用逆转录聚合酶链反应和Western-Blot检测清道夫受体A1和CD36的mRNA和蛋白表达。结果高浓度的肺炎衣原体(5×105和1×106IFU)感染负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞48h后,细胞质内的脂滴明显增多,胆固醇酯占总胆固醇百分比明显增加(>50%)。在负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞上,肺炎衣原体感染呈浓度和时间依赖性地上调道夫受体A1 mRNA和蛋白表达,但不影响CD36 mRNA和蛋白表达。结论清道夫受体A1表达上调是肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制之一,这可能为进一步阐明肺炎衣原体感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据。

摘要:为研究苦瓜蛋白对泡沫细胞形成的作用及其机制,用离心、超滤和色谱技术从苦瓜(MomordicacharantiaL)果肉中提取苦瓜蛋白(Momordicin) ,THP 1细胞经16 0nmol/LPMA孵育2 4h ,诱导其分化成巨噬细胞,然后用2 5mg/L乙酰化低密度脂蛋白孵育4 8h ,使其泡沫化,以观察苦瓜蛋白对泡沫细胞形成的影响。用高效液相色谱法分析细胞内胆固醇和胆固醇酯的变化,用逆转录—聚合酶链反应技术检测苦瓜蛋白对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响。结果发现,经苦瓜蛋白作用后,细胞内总胆固醇及胆固醇酯均显著减少(对照组总胆固醇为6 34±2 1,苦瓜蛋白处理组为2 5 7±2 6 ,P<0 .0 1;对照组胆固醇酯为339±2 1,苦瓜蛋白处理组为93±9,P<0 .0 1)。胆固醇酯与总胆固醇比值从对照组的6 2 .9%下降到36 .2 %。同时,细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达显著上调(P<0 .0 5 )。提示苦瓜蛋白抑制THP 1单核巨噬细胞源性泡沫细胞的形成可能与上调三磷酸腺苷结合盒转运体A1有关。

摘要:越来越多的实验结果证实巨噬细胞集落刺激因子在动脉粥样硬化发生过程中的重要作用,为了探讨巨噬细胞集落刺激因子和活性氧与动脉粥样硬化之间的相互关系,观察了巨噬细胞集落刺激因子对培养的小鼠腹腔巨噬细胞抗氧化酶活性的影响。结果发现巨噬细胞集落刺激因子能使小鼠腹腔巨噬细胞谷胱甘肽过氧化物酶活性提高32%,超氧化物歧化酶的活性提高120%,并减轻叔丁基氢过氧化物促巨噬细胞源性泡沫细胞形成,以及提高巨噬细胞的生存数。此结果提示巨噬细胞集落刺激因子提高杭氧化酶活性的作用可能是其虽增加对氧化修饰低密度脂蛋白和胆固醇的摄入却能阻止泡沫细胞形成及动脉粥样硬化发生发展的原因之一。