摘要:目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导心肌成纤维细胞趋化运动中可能的作用机制。方法 培养新生SD大鼠的心肌成纤维细胞,将细胞随机分为空白对照组、TGF-β1组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制因子(SP600125,10 μmol/L)组、P38MAPK抑制因子(SB203580,10 μmol/L)组、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)抑制因子(U0126,10 μmol/L)组,除空白对照组外,其余组均给与10 μg/L TGF-β1及对应抑制因子处理。MTT比色法测定心肌成纤维细胞增殖活性,Transwell小室检测心肌成纤维细胞运动能力,羟脯氨酸试剂盒检测胶原含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌成纤维细胞中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)水平,Western blot检测成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。结果 TGF-β1可明显促进心肌成纤维细胞增殖活性、趋化运动能力及胶原含量,MAPK信号途径抑制因子干预后能够抑制这种增殖及趋化运动,并降低胶原含量(P＜0.05)；ELISA结果显示,MAPK信号途径抑制因子能够显著降低TGF-β1处理后导致的MCP-1、PAI-1水平升高(P＜0.05)；Western blot结果显示,MAPK信号途径抑制因子能够显著降低TGF-β1处理后导致的α-SMA、Col-1、MMP-9蛋白表达升高(P＜0.05)。结论 TGF-β可能通过激活MAPK信号通路促进心肌成纤维细胞的趋化运动,通过使用MAPK抑制剂能够一定程度的抑制心肌纤维化。

摘要:目的 探讨丹皮酚抑制脂多糖诱导后THP-1细胞分泌外泌体的作用及机制。方法 超速离心法提取外泌体,透射电镜(TEM)观察外泌体形态,Western blot检测标志蛋白Alix、TSG101、CD9和CD63,动态光散射检测外泌体粒径。CCK-8检测细胞存活率,BCA法检测外泌体蛋白量,Western blot检测N-SMase2、p-p38 MAPK蛋白水平。结果 超速离心法获得的微囊泡结构物具有完整清晰茶托样膜,直径众数为130 nm,含标志性蛋白Alix、TSG101、CD9和CD63,鉴定为外泌体。丹皮酚(120、60及30 μmol/L)可降低脂多糖(1 mg/L)诱导的THP-1细胞分泌外泌体,减少N-SMase2蛋白表达,抑制p38 MAPK磷酸化。结论 丹皮酚抑制THP-1细胞外泌体分泌,该作用与抑制p38 MAPK/N-SMase2通路有关。

摘要:目的 探讨补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1(CTRP1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附分子表达及黏附功能的影响及其分子机制。方法 体外实验采用培养HUVEC和人单核细胞白血病细胞株THP-1细胞。(1)采用不同浓度rCTRP1(10、100、1 000 μg/L)刺激HUVEC 24 h,用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA和蛋白表达水平；(2)不同浓度rCTRP1(10、100、1 000 μg/L)或TNF-α(10 μg/L)分别刺激HUVEC 24 h,通过共孵育HUVEC和THP-1 在倒置荧光显微镜下观察单个核细胞-内皮细胞黏附情况；(3)对照组:生理盐水和BSA(10 μg)为阴性对照,TNF-α(3 μg)为阳性对照；实验组:rCTRP1(3、10 μg)分别腹腔注射小鼠,倒置显微镜下实时观察小鼠肠系膜上动脉中白细胞的滚动及黏附情况；(4)1 000 μg/L rCTRP1刺激HUVEC(15、30、60 min),采用Western blot检测p38、ERK、JNK、p65的磷酸化水平,应用SB203580抑制p38MAPK信号通路后,Western blot检测黏附分子VCAM-1、ICAM-1的蛋白表达。结果 (1)rCTRP1刺激HUVEC后,黏附分子VCAM-1和ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),呈剂量依赖性,尤以ICAM-1明显；(2)体外实验:随着CTRP1刺激剂量增加,单个核细胞-内皮细胞黏附数显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；体内实验:小鼠腹腔注射rCTRP1后,血管内白细胞滚动速度显著下降,黏附在内皮的细胞数目显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.05)；(3)rCTRP1刺激HUVEC后p38和p65磷酸化水平显著增加,ERK、JNK磷酸化水平无明显变化,SB203580抑制p38MAPK信号通路后,rCTRP1诱导的VCAM-1和ICAM-1蛋白表达显著下降(P＜0.05)。结论 CTRP1诱导内皮细胞分泌VCAM-1和ICAM-1,增加内皮细胞黏附能力,其机制可能是通过激活p38MAPK信号通路。

摘要:心血管疾病的发生发展与慢性炎症有关。p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)介导的信号通路在心血管细胞炎症、增殖、分化、迁移和代谢中起着重要作用。抑制p38MAPK可有效抑制炎症介质的表达,由于p38抑制剂在安全性方面不可接受,故研究其下游底物是很有必要的。丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2(MK2)是p38MAPK重要的下游底物且参与了心血管疾病的发生发展。因此抑制MK2的活性在心血管疾病的治疗及预防中具有重大的临床意义。文章主要对MK2的结构功能和在心血管疾病中的作用展开综述。

摘要:目的 研究姜黄素对脂质运载蛋白2 (LCN-2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及与p38 MAPK通路的关系。方法 以LCN-2不同质量浓度(0,5,10,20 μmol/L)及不同时间(0,24,48,72 h)作用HUVEC,CCK-8法测细胞增殖,流式细胞仪测细胞凋亡,ELISA测细胞上清液中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及白细胞介素6(IL-6)含量,比色法测乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western blot测HUVEC中p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表达；分别加入10 μmol/L姜黄素和25 μmol/L SB203580观察姜黄素的干预作用。结果 与对照组比较,LCN-2可显著抑制HUVEC增殖,上调HUVEC内Bax/Bcl-2蛋白比率而促进细胞凋亡,诱导HUVEC分泌MCP-1及IL-6,增加LDH活性(P＜0.05)；与LCN-2组比较,姜黄素及SB203580均可显著减轻LCN-2诱导的HUVEC增殖抑制,下调Bax/Bcl-2蛋白比率而抑制HUVEC凋亡,减少LCN-2诱导的HUVEC分泌MCP-1及IL-6,降低LDH活性(P＜0.05)。结论 姜黄素可通过抑制p38 MAPK通路,减轻LCN-2诱导的HUVEC损伤。

摘要:过氧化物还原酶(Prx)是高度保守的过氧化物酶。Prx的硫氧还蛋白过氧化物酶的活性对维持低水平内源性过氧化氢具有重要意义,并有促进过氧化氢介导的信号功能。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径介导细胞对包括活性氧(ROS)在内的多种刺激作出反应。文章在此总结Prx可以在MAPK的激活中同时扮演传感器和障碍的证据,并讨论所涉及的具体机制,特别是其与硫氧还蛋白(Trx)的关系。

摘要:目的　探讨丹参酮ⅡA对主动脉内皮细胞环氧合酶2（COX-2）表达的影响及相关机制。方法　体外培养人主动脉内皮细胞株并分为三组：血管紧张素Ⅱ（100　nmol/L）组、血管紧张素Ⅱ（100　nmol/L）＋丹参酮ⅡA（1　μmmol/L）组及对照组，共培养10　min、1　h及2　h后分别收集细胞，运用实时荧光定量PCR检测COX-2　mRNA的表达量，Western　blot检测COX-2、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）、核因子κB（NF-κB）及磷酸化NF-κB（p-NF-κB）蛋白表达的变化。结果　在血管紧张素Ⅱ的作用下，内皮细胞内COX-2　mRNA和蛋白表达水平明显增加（P<0.01），且p-p38MAPK和p-NF-κB水平也同步提高（P<0.01）。加用丹参酮ⅡA处理后，内皮细胞COX-2　mRNA和蛋白表达水平显著下降（P<0.01），p-p38MAPK和p-NF-κB水平也受到明显抑制（P<0.01）。结论　丹参酮ⅡA明显抑制主动脉内皮细胞COX-2的表达，其机制可能与抑制p38MAPK、NF-κB的磷酸化有关。

摘要:目的 观察促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导培养的乳鼠心脏成纤维细胞（CF）表型转化的影响，以及其可能的信号通路（TGF-β1-TAK1-p38MAPK）在其中的作用。方法 体外分离培养乳鼠心脏成纤维细胞，用10－6 mol/L的AngⅡ诱导培养心脏成纤维细胞表型转化，加入20 kU/L的EPO进行预干预，同时加或不加15 μmol/L的SB203580进行处理，以平滑肌肌动蛋白（SMA）表达作为心脏成纤维细胞表型转化的观察指标，应用免疫组织化学观察心脏成纤维细胞内SMA表达情况;采用实时荧光定量PCR方法检测细胞内信号分子转化生长因子β1（TGF-β1）及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）mRNA的表达情况;采用蛋白免疫印迹法检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、TGF-β1、转化生长因子激活性激酶1（TAK1）、p38MAPK以及磷酸化的TAK1（p-TAK1）和p-p38MAPK的表达情况。结果 20 kU/L的EPO能有效抑制AngⅡ诱导的CF细胞表型转化，减少CF细胞内α-SMA蛋白的沉积，降低CF表型转化相关信号分子TGF-β1、p-TAK1、TAK1、p-p38MAPK和p38MAPK的活化或表达，且加入SB203580后该作用增强。结论 EPO可抑制AngⅡ诱导的乳鼠心脏成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞，减轻心肌纤维化，并可降低相关信号分子mRNA及蛋白的表达，初步考虑EPO抑制心肌纤维化，减轻心室重构的作用是通过TGF-β1-TAK1-p38MAPK进行的。

摘要:目的 研究硫化氢（H2S）是否通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素（DOX）引起的损伤。方法 应用DOX处理心肌细胞建立心肌细胞损伤模型。为观察H2S 的保护作用，在DOX处理心肌细胞前，应用400 μmol/L 硫氢化钠（NaHS，为H2S的供体）预处理细胞30 min。Western blot法测定p38MAPK蛋白的表达水平;应用细胞计数试剂盒8（CCK-8）比色法测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;双氯荧光素（DCFH-DA）染色荧光显微镜照相测定细胞内活性氧（ROS）水平。结果 在15～60 min的时间范围内，5 μmol/L DOX呈时间依赖性地上调心肌细胞磷酸化p38MAPK的表达水平;在DOX作用心肌细胞前，400 μmol/L NaHS预处理30 min能明显地抑制DOX对p-p38MAPK表达的上调作用，并能显著地阻断DOX引起的心肌细胞损伤，使细胞存活率升高、凋亡细胞数量和ROS生成均减少;与NaHS的保护作用相似，p38MAPK的抑制剂SB203580（3 μmol/L ）预处理60 min能保护H9c2心肌细胞对抗DOX引起的损伤。结论 p38MAPK通路参与DOX对心肌细胞的损伤作用;H2S可通过抑制p38MAPK通路保护心肌细胞对抗DOX诱导的损伤。

摘要:目的探讨血管紧张素（1-7）［Ang-(1-7)］ 阻断血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）致炎作用的可能机制。方法原代培养人脐静脉内皮细胞，取2～5代用于实验。培养细胞随机分两组：Ⅰ组：对照组， AngⅡ组和AngⅡ+不同浓度Ang (1-7)组；Ⅱ组：对照组 ，AngⅡ组，Ang (1-7)组，AngⅡ+Ang-(1-7)组，AngⅡ+Ang (1-7)+A-779组，A-779组。用免疫印迹法测定细胞p38MAPK磷酸化表达。培养细胞用RT-PCR法测定Ang(1-7)的特异性受体Mas受体的表达。结果100 nmol/L Ang（1-7）可以拮抗100 nmol/L AngⅡ诱导的人脐静脉内皮细胞p38MAPK磷酸化表达，且呈剂量依赖性。随着Ang（1-7）剂量的增加p38MAPK磷酸化表达逐渐减弱，在1000 nmol/L Ang（1-7）时即有明显减弱。Ang（1-7）受体特异性拮抗剂A-779可显著抑制Ang（1-7）的此作用。结论Ang（1-7）呈剂量依赖性拮抗AngⅡ激活人脐静脉内皮细胞p38MAPK通路的作用。